祛痰活血开窍法对脑组织缺血性损伤的保护及其机制的研究
作者：陈朝凤 谭宝璇 陈洁文 李小英 雷娓娓
单位：(广州中医药大学 广州 510405)
关键词：脑脉Ⅱ号；神经保护作用；超微结构；葡萄糖代谢；氧自由基
浙江中西医结合杂志000102 摘 要：目的：探讨具有祛痰活血开窍功效的中药复方脑脉Ⅱ号对急性脑缺血性损伤的保护作用及其机制。方法：采用电镜技术及放射性核素示踪法等技术，从功能与结构方面进行研究。结果：脑脉Ⅱ号能减轻急性脑缺血大鼠大脑皮层组织结构的损伤程度，提高缺血脑组织的SOD、GSH-Px活性，并减少LOP含量，能增加脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量。结论：脑脉Ⅱ号能减小缺血对脑细胞的损伤，从而起保护作用，其作用机制可能与对抗自由基攻击和减小能量耗竭等有关。
Studies on the method of the expectorating sputum，promoting blood circulation and inducing resuscitation in protecting the ischemic cerebral damages
, 百拇医药
Chen chaofeng
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Tan baoxuan
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Chen jiewen
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Li xiaoying
, 百拇医药
Lei weiwei
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Abstract：Objective：To explore the value and mechanism of No.2 Nao-mai Co.in protecting cerebral damages caused by the acute cerebral ischmia.Method：By using electron microscopy and radionuclide tracing techniques，the cerebral structures and functions were studied.Result：No.2 Nao-mai Co.was proved to be effective in lowering the cerebral damages caused by the acute ischmia，raising the levels of SOD，GSH-Px and reducing the LPO concentration.It also played a role in raising the concentration of 3H-deoxyglucose.Conclusion：No.2 Nao-mai Co.could protect the ischmeic cerebral damages whose mechanism might be related to its anti-free radicals delaying the energy exhaustion.
, http://www.100md.com
Key word：No.Nao-mao Co. neural protection ultrastructure glucose metablism free radical▲
缺血性脑血管病是一种严重危害人类健康的病症，探讨脑细胞缺血缺氧性损伤机制，寻找保护作用显著的中医方药仍是当前医学上的重大课题。我校附一院心脑内科结合多年临床经验，拟定由石菖蒲、川芎、郁金、半夏、僵蚕、天麻等中药组成，具有活血祛痰、开窍醒脑作用的脑脉Ⅱ号方，临床用于治疗缺血性脑病疗效满意。本研究目的是从不同水平，宏观与微观结合，系统探讨脑脉Ⅱ号对急性缺血性脑组织的保护作用及其作用机制，为脑脉Ⅱ号在临床上推广应用提供科学依据。
1 实验材料
1.1 药物和主要试剂 脑脉Ⅱ号注射液由我校中药新药开发研究所研制，每ml含生药1g，按中药注射剂制备的常规工艺流程，分挥发油成分和水溶性成分两次提炼而成。3H-2-脱氧葡萄糖由中国科学院上海核技术开发公司提供。
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1.2 动物SD大鼠，体重190～210g;KM小鼠，体重18～22g。以上动物均为清洁级。
1.3 仪器JEM-1200EX型透射电镜(日本产品)，AO-型超薄切片机(奥地利产品)，LS-1801型液体闪烁仪，753紫外线分光光度计。
2 实验方法及检测指标
2.1 电镜观察急性脑缺血大鼠大脑皮层超微结构的变化 实验使用SD大鼠，分正常组、模型组和脑脉Ⅱ号组，脑脉Ⅱ号组用脑脉Ⅱ号作腹腔注射1ml/(kg。d)×7天。于第7天注药后30min,采用“结扎双侧颈总动脉合并血压下降法”制备急性不完全性脑缺血模型，脑缺血45min开始开颅取右侧大脑皮层，经固定、脱水、包埋等过程，再切成厚约50nm超薄片，染色后置电镜下观察神经细胞、胶质细胞和微细血管的形态结构变化。模型组和正常组大鼠用生理盐水代替脑脉Ⅱ号作腹腔注射，模型组按上法制备脑缺血模型，对照组不作脑缺血模型手术，直接取脑观察。
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2.2 脑组织自由基检测 使用动物分组、造模同动物取左侧大脑皮层经匀浆后，分别测定其SOD(邻苯三酚自氧化法)、GSH-Px(DTNB直接法)、LPO(丙二醛TBA)。
2.3 小鼠脑组织3H-脱氧葡萄糖含量的测定 实验分生理盐水对照组和脑脉Ⅱ号组。脑脉Ⅱ号组用脑脉Ⅱ号作腹腔注射(1ml/kg。d×7天)，第7天注药30min后腹腔注射3H-2-脱氧葡萄糖(2μci/只)，45min后将小鼠处死，快速剥离右侧大脑皮层，称重后经消化至清晰，用液体闪烁计数仪测定脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量。
2.4 统计学方法 采用组间t检验。
3 实验结果
3.1 脑脉Ⅱ号对急性脑缺血大鼠大脑皮层超微结构变化的影响 正常组 神经细胞和胶质细胞双层胞膜、核膜清晰完整，核内染色质无凝集现象；线粒体正常，其嵴结构清晰。毛细血管管腔宽，内可见红细胞，管壁光滑，内皮细胞基底膜完整。模型组 神经细胞和胶质细胞肿胀，胞膜、核膜严重破损而模糊不清；核内染色质成团块状聚集于核周边，胞质明显水肿，可见大片空白区域；线粒体肿胀，嵴不清。毛细血管管腔明显变窄，管壁内皮细胞有大量伪足向管腔伸出，并有吞饮泡，管周有明显水肿区域。脑脉Ⅱ号组 神经细胞形态接近正常，双层核膜基本清晰，核内染色质无凝集，胞质中仅见少许水肿空白区。胶质细胞轻度肿胀，核膜有轻度破损，胞质轻度水肿，无明显空白区域；线粒体结构接近正常。毛细血管管腔较宽，管内可见红细胞，管壁光滑，内皮细胞无肿胀，基底膜完整，管周轻度水肿。
, 百拇医药
结果显示，脑脉Ⅱ号能明显减轻缺血的大脑皮层神经细胞、胶质细胞和毛细血管的损伤程度，对缺血脑组织的形态学损伤有显著保护作用。
3.2 脑脉Ⅱ号对急性缺血脑组织氧自由基的影响 脑脉Ⅱ号组大鼠大脑皮层脑组织的SOD、GSH-Px活性比对照组、模型组显著升高(P<0.01)，而LPO则显著减少(P<0.01)，见表1。
表1 脑脉Ⅱ号对缺血脑组织氧自由基的影响(
±s) 分 组
n/只
SOD
/(u/mg湿组织)
GSH-Px
, 百拇医药
/(u/mg湿组织)
LPO
/(nmol/mg湿组织)
对照组
10
0.947±0.236
25.58±2.737
0.239±0.020
模型组
12
0.796±0.176
21.28±3.070
, http://www.100md.com
0.279±0.034
脑脉Ⅱ号组
12
1.246±0.256**
29.38±2.129**
0.203±0.032**
脑脉Ⅱ号组与对照组、模型组比较，**p<0.013.3 脑脉Ⅱ号对小鼠脑组织葡萄糖含量的影响 脑脉Ⅱ号组小鼠大脑皮层脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量比生理盐水组明显增高，P<0.05，见表2。
表2 脑脉Ⅱ号对小鼠大脑皮层组织3H-脱氧葡萄糖含量的影响(±s) 组 别
, 百拇医药
n/只
放射性含量/
(DPM×104/100mg湿组织)
生理盐水组
18
3.185±0.484
脑脉Ⅱ号组
18
3.561±0.538*
与生理盐水组比较，*P<0.054 讨 论
脑缺血缺氧性疾病是危害人类健康的常见病症。我校附一院拟定方脑脉Ⅱ号，在临床上治疗各类脑中风、脑性眩晕等均取得满意疗效[1]。脑脉Ⅱ号方中石菖蒲芳香开窍，祛浊醒脑；川芎活血通络；僵蚕化痰息风；郁金辅菖薄开窍而宁心，活血而理气；丹参助川芎有增强活血通窍之功；半夏天麻佐僵蚕祛痰降逆而通痹。全方具有活血开窍、祛痰通络、息风醒神的作用。现代药理研究也表明，川芎、丹参等活血祛痰药具有扩张血管，改善微循环，抑制血小板聚集，改善血液流变性等作用[2]；姜习炙等通过电镜观察到祛痰开窍中药(菖蒲、胆南星、法半夏)对缺血脑细胞有保护作用[3]。
, 百拇医药
关于脑缺血缺氧损伤的机制，目前主要有以下几种学说：兴奋性谷氨酸的毒性作用；自由基的攻击；胞内Ca2+超载；线粒体能源耗竭等[4]。本实验观察到，脑脉Ⅱ号能减轻缺血脑组织超微结构的形态学损伤，能提高缺血脑组织的SOD和GSH-Px活性，降低LPO含量，能增加脑组织脱氧葡萄糖的含量。提示脑脉Ⅱ号保护缺血缺氧脑细胞的作用机制可能与减少自由基的攻击，以及减少能量耗竭有关。我们的另一些研究还观察到其与拮抗谷氨酸毒性作用有关[5]。■
基金项目：本研究为国家中医药管理局资助项目(No95B130)
参考文献：
[1]蒋美芬，陈宏王 圭，洪永敦.脑脉Ⅱ号治疗脑性眩晕280例临床观察.新中医，1997，(11)：21
[2]骆和生，王建华主编.中药方药和药理与临床研究进展.华南理工大学出版社，1991.215，222
[3]姜习炙，等.豁痰开窍中药对急性实验性缺血脑细胞超微结构的影响.解放军医学杂志，1995，20(2)：358
[4]唐健民，刘振伟，丁爱石，等.海马脑片缺氧损伤电位机制的研究.中国应用生理学杂志，1996，12(2)：165
5 陈朝凤，谭宝璇，陈洁文，等.脑脉Ⅱ号对大鼠海马脑片诱发电位的作用及机理研究.生理学通报，(广东)1997，14(1)：15
收稿日期：1999-07-06, 百拇医药
单位：(广州中医药大学 广州 510405)
关键词：脑脉Ⅱ号；神经保护作用；超微结构；葡萄糖代谢；氧自由基
浙江中西医结合杂志000102 摘 要：目的：探讨具有祛痰活血开窍功效的中药复方脑脉Ⅱ号对急性脑缺血性损伤的保护作用及其机制。方法：采用电镜技术及放射性核素示踪法等技术，从功能与结构方面进行研究。结果：脑脉Ⅱ号能减轻急性脑缺血大鼠大脑皮层组织结构的损伤程度，提高缺血脑组织的SOD、GSH-Px活性，并减少LOP含量，能增加脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量。结论：脑脉Ⅱ号能减小缺血对脑细胞的损伤，从而起保护作用，其作用机制可能与对抗自由基攻击和减小能量耗竭等有关。
Studies on the method of the expectorating sputum，promoting blood circulation and inducing resuscitation in protecting the ischemic cerebral damages
, 百拇医药
Chen chaofeng
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Tan baoxuan
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Chen jiewen
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Li xiaoying
, 百拇医药
Lei weiwei
(Guang Zhou Traditional Chinese Medicine and Pharmacy University，Guangzhou 510405)
Abstract：Objective：To explore the value and mechanism of No.2 Nao-mai Co.in protecting cerebral damages caused by the acute cerebral ischmia.Method：By using electron microscopy and radionuclide tracing techniques，the cerebral structures and functions were studied.Result：No.2 Nao-mai Co.was proved to be effective in lowering the cerebral damages caused by the acute ischmia，raising the levels of SOD，GSH-Px and reducing the LPO concentration.It also played a role in raising the concentration of 3H-deoxyglucose.Conclusion：No.2 Nao-mai Co.could protect the ischmeic cerebral damages whose mechanism might be related to its anti-free radicals delaying the energy exhaustion.
, http://www.100md.com
Key word：No.Nao-mao Co. neural protection ultrastructure glucose metablism free radical▲
缺血性脑血管病是一种严重危害人类健康的病症，探讨脑细胞缺血缺氧性损伤机制，寻找保护作用显著的中医方药仍是当前医学上的重大课题。我校附一院心脑内科结合多年临床经验，拟定由石菖蒲、川芎、郁金、半夏、僵蚕、天麻等中药组成，具有活血祛痰、开窍醒脑作用的脑脉Ⅱ号方，临床用于治疗缺血性脑病疗效满意。本研究目的是从不同水平，宏观与微观结合，系统探讨脑脉Ⅱ号对急性缺血性脑组织的保护作用及其作用机制，为脑脉Ⅱ号在临床上推广应用提供科学依据。
1 实验材料
1.1 药物和主要试剂 脑脉Ⅱ号注射液由我校中药新药开发研究所研制，每ml含生药1g，按中药注射剂制备的常规工艺流程，分挥发油成分和水溶性成分两次提炼而成。3H-2-脱氧葡萄糖由中国科学院上海核技术开发公司提供。
, http://www.100md.com
1.2 动物SD大鼠，体重190～210g;KM小鼠，体重18～22g。以上动物均为清洁级。
1.3 仪器JEM-1200EX型透射电镜(日本产品)，AO-型超薄切片机(奥地利产品)，LS-1801型液体闪烁仪，753紫外线分光光度计。
2 实验方法及检测指标
2.1 电镜观察急性脑缺血大鼠大脑皮层超微结构的变化 实验使用SD大鼠，分正常组、模型组和脑脉Ⅱ号组，脑脉Ⅱ号组用脑脉Ⅱ号作腹腔注射1ml/(kg。d)×7天。于第7天注药后30min,采用“结扎双侧颈总动脉合并血压下降法”制备急性不完全性脑缺血模型，脑缺血45min开始开颅取右侧大脑皮层，经固定、脱水、包埋等过程，再切成厚约50nm超薄片，染色后置电镜下观察神经细胞、胶质细胞和微细血管的形态结构变化。模型组和正常组大鼠用生理盐水代替脑脉Ⅱ号作腹腔注射，模型组按上法制备脑缺血模型，对照组不作脑缺血模型手术，直接取脑观察。
, http://www.100md.com
2.2 脑组织自由基检测 使用动物分组、造模同动物取左侧大脑皮层经匀浆后，分别测定其SOD(邻苯三酚自氧化法)、GSH-Px(DTNB直接法)、LPO(丙二醛TBA)。
2.3 小鼠脑组织3H-脱氧葡萄糖含量的测定 实验分生理盐水对照组和脑脉Ⅱ号组。脑脉Ⅱ号组用脑脉Ⅱ号作腹腔注射(1ml/kg。d×7天)，第7天注药30min后腹腔注射3H-2-脱氧葡萄糖(2μci/只)，45min后将小鼠处死，快速剥离右侧大脑皮层，称重后经消化至清晰，用液体闪烁计数仪测定脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量。
2.4 统计学方法 采用组间t检验。
3 实验结果
3.1 脑脉Ⅱ号对急性脑缺血大鼠大脑皮层超微结构变化的影响 正常组 神经细胞和胶质细胞双层胞膜、核膜清晰完整，核内染色质无凝集现象；线粒体正常，其嵴结构清晰。毛细血管管腔宽，内可见红细胞，管壁光滑，内皮细胞基底膜完整。模型组 神经细胞和胶质细胞肿胀，胞膜、核膜严重破损而模糊不清；核内染色质成团块状聚集于核周边，胞质明显水肿，可见大片空白区域；线粒体肿胀，嵴不清。毛细血管管腔明显变窄，管壁内皮细胞有大量伪足向管腔伸出，并有吞饮泡，管周有明显水肿区域。脑脉Ⅱ号组 神经细胞形态接近正常，双层核膜基本清晰，核内染色质无凝集，胞质中仅见少许水肿空白区。胶质细胞轻度肿胀，核膜有轻度破损，胞质轻度水肿，无明显空白区域；线粒体结构接近正常。毛细血管管腔较宽，管内可见红细胞，管壁光滑，内皮细胞无肿胀，基底膜完整，管周轻度水肿。
, 百拇医药
结果显示，脑脉Ⅱ号能明显减轻缺血的大脑皮层神经细胞、胶质细胞和毛细血管的损伤程度，对缺血脑组织的形态学损伤有显著保护作用。
3.2 脑脉Ⅱ号对急性缺血脑组织氧自由基的影响 脑脉Ⅱ号组大鼠大脑皮层脑组织的SOD、GSH-Px活性比对照组、模型组显著升高(P<0.01)，而LPO则显著减少(P<0.01)，见表1。
表1 脑脉Ⅱ号对缺血脑组织氧自由基的影响(
±s) 分 组n/只
SOD
/(u/mg湿组织)
GSH-Px
, 百拇医药
/(u/mg湿组织)
LPO
/(nmol/mg湿组织)
对照组
10
0.947±0.236
25.58±2.737
0.239±0.020
模型组
12
0.796±0.176
21.28±3.070
, http://www.100md.com
0.279±0.034
脑脉Ⅱ号组
12
1.246±0.256**
29.38±2.129**
0.203±0.032**
脑脉Ⅱ号组与对照组、模型组比较，**p<0.013.3 脑脉Ⅱ号对小鼠脑组织葡萄糖含量的影响 脑脉Ⅱ号组小鼠大脑皮层脑组织的3H-脱氧葡萄糖含量比生理盐水组明显增高，P<0.05，见表2。
表2 脑脉Ⅱ号对小鼠大脑皮层组织3H-脱氧葡萄糖含量的影响(
±s) 组 别, 百拇医药
n/只
放射性含量/
(DPM×104/100mg湿组织)
生理盐水组
18
3.185±0.484
脑脉Ⅱ号组
18
3.561±0.538*
与生理盐水组比较，*P<0.054 讨 论
脑缺血缺氧性疾病是危害人类健康的常见病症。我校附一院拟定方脑脉Ⅱ号，在临床上治疗各类脑中风、脑性眩晕等均取得满意疗效[1]。脑脉Ⅱ号方中石菖蒲芳香开窍，祛浊醒脑；川芎活血通络；僵蚕化痰息风；郁金辅菖薄开窍而宁心，活血而理气；丹参助川芎有增强活血通窍之功；半夏天麻佐僵蚕祛痰降逆而通痹。全方具有活血开窍、祛痰通络、息风醒神的作用。现代药理研究也表明，川芎、丹参等活血祛痰药具有扩张血管，改善微循环，抑制血小板聚集，改善血液流变性等作用[2]；姜习炙等通过电镜观察到祛痰开窍中药(菖蒲、胆南星、法半夏)对缺血脑细胞有保护作用[3]。
, 百拇医药
关于脑缺血缺氧损伤的机制，目前主要有以下几种学说：兴奋性谷氨酸的毒性作用；自由基的攻击；胞内Ca2+超载；线粒体能源耗竭等[4]。本实验观察到，脑脉Ⅱ号能减轻缺血脑组织超微结构的形态学损伤，能提高缺血脑组织的SOD和GSH-Px活性，降低LPO含量，能增加脑组织脱氧葡萄糖的含量。提示脑脉Ⅱ号保护缺血缺氧脑细胞的作用机制可能与减少自由基的攻击，以及减少能量耗竭有关。我们的另一些研究还观察到其与拮抗谷氨酸毒性作用有关[5]。■
基金项目：本研究为国家中医药管理局资助项目(No95B130)
参考文献：
[1]蒋美芬，陈宏王 圭，洪永敦.脑脉Ⅱ号治疗脑性眩晕280例临床观察.新中医，1997，(11)：21
[2]骆和生，王建华主编.中药方药和药理与临床研究进展.华南理工大学出版社，1991.215，222
[3]姜习炙，等.豁痰开窍中药对急性实验性缺血脑细胞超微结构的影响.解放军医学杂志，1995，20(2)：358
[4]唐健民，刘振伟，丁爱石，等.海马脑片缺氧损伤电位机制的研究.中国应用生理学杂志，1996，12(2)：165
5 陈朝凤，谭宝璇，陈洁文，等.脑脉Ⅱ号对大鼠海马脑片诱发电位的作用及机理研究.生理学通报，(广东)1997，14(1)：15
收稿日期：1999-07-06, 百拇医药